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红细胞ABO血型系统

　　(一)ABO血型系统的抗原及抗体

　　血型：指红细胞表面抗原的差异，血小板和白细胞表面抗原也存在差异，因此，血型是抗原抗体系统的遗传特征。

　　Karl Landsteiner

　　1.ABO血型抗原

　　(1)ABO抗原的遗传：第9号染色体的长臂3区4带，显性基因A、B，隐性基因O。

　　六个基因型：O0、AA、A0、BB、B0、AB。

　　四种表现型：A、B、O、AB。

　　(2)ABO抗原的发生

　　(3)ABO分泌型

　　ABH血型特异物质

　　存在于唾液(含量最丰富)、尿、泪液、胃液、胆汁、羊水、血清、精液、汗液、乳汁等体液中，但不存在于脑脊液。这些可溶性抗原又被称为血型物质。

　　分泌型 体液中存在血型物质(可溶性抗原)。

　　非分泌型 无血型物质者。

　　血型物质意义

　　①测定唾液血型物质，可辅助鉴定血型。

　　②中和ABO血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体，鉴别抗体的性质。

　　③检查羊水，可预测胎儿ABO血型等。

　　2.AB0系统抗体

　　(1)天然抗体与免疫性抗体

　　天然抗体：在没有可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以IgM为主，又称完全抗体或盐水抗体;也可能是由一种无觉察的免疫刺激产生而得。

　　免疫性抗体：有IgM、IgG、IgA，但主要是IgG。抗A和抗B可以是IgM与IgG，甚至是IgM、IgG、IgA的混合物，但主要是IgM，而O型血清中以IgG为主。

　　(2)天然抗体和免疫抗体的主要区别见下表。

特性	天然抗体（IgM）	免疫抗体（IgG）
抗原刺激	无察觉	有（妊娠、输血）
相对分子质量	100万	16万
与红细胞反应最适温度	4～25℃	37℃
被血型物质中和	能	不能
溶血素效价	较低	较高
耐热性	不耐热（冷抗体）	耐热（温抗体）
在盐水中与相应红细胞发生肉眼可见凝集	能	不能
对酶处理红细胞的反应	变化不大	能反应
通过胎盘	不能	能
与巯基乙醇或二硫苏糖醇的反应	灭活	不被灭活

　　(二)AB0血型系统的亚型

　　亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异。

　　A亚型：最多见，A亚型主要有A1和A2，占全部A型血的99.9%，其他A亚型(A3、AX、AM)为少数;作AB0血型鉴定时，应加O型血清，以防对A亚型误定型。

　　B亚型：(B3、BM、BX)比A亚型少见，临床意义不大。

　　1.A1、A2亚型基本特征

　　A1亚型：红细胞上具有A1和A抗原，血清中含有抗B抗体。

　　A2亚型：红细胞上只有A抗原，血清中除含抗B抗体外，还有少量抗A1抗体。

　　2.A1、A2亚型的鉴定方法

　　A1和A2表型鉴别

　　3.A1、A2亚型鉴定的意义

　　目的是防止误定血型。尽管我国A2、A2B型在A与AB型中所占比例少于1%，但定型时易将弱A亚型误定为O型，如果给其输入0型血，不会有太大问题，但是如果把弱A亚型误定为0型，并输给O型人，则受血者的抗A抗体就可能与输入的弱A亚型的红细胞起反应，引起血管内溶血性输血反应。

　　(三)AB0血型鉴定

　　1.原理 常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。

　　常规的方法有：

　　①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。

　　②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。

　　结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。

　　红细胞的常规AB0定型

正向定型			反向定型			血型
抗-A	抗-B	抗-AB	A细胞	B细胞	O细胞
-	-	-	+	+	-	O
+	-	+	-	+	-	A
-	+	+	+	-	-	B
+	+	+	-	-	-	AB

　　2.鉴定方法

　　(1)生理盐水凝集法

　　①玻片法

　　操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长;被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。

　　②试管法

　　由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。

　　玻片法凝集结果判断

呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞	＋＋＋＋
呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞	＋＋＋
数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1/2	＋＋
肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集	＋
可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞	±
可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布	混合凝集外观
镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布	－

　　(2)凝胶微柱法

　　是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。

　　3.抗A、抗B和抗AB标准血清

　　标准血清均采自健康人，并应符合下述条件：

　　①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。

　　②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1:128以上。

　　③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s;抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。

　　④冷凝集素效价：在1:4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。

　　(四)交叉配血法

　　最重要的AB0血型配合试验之一。必须在AB0血型相同，且交叉配血无凝集时才能输血。

　　1.目的：

　　检查受血者与供血者是否存在血型抗原与抗体不合的情况。

　　2.原则：

　　主侧加受血者血清与供血者红细胞;次侧加受血者红细胞与供血者血清，观察两者是否出现凝集。

　　3.方法

　　(1)盐水配血法：简便快速。主要缺点是只能检出不相配合的完全抗体，而不能检出不完全抗体。

　　(2)抗球蛋白法配血法：又称Coombs试验。是最可靠的确定不完全抗体的方法，但操作繁琐。抗球蛋白法配血法是最早用于检查不完全抗体的方法。

　　直接抗球蛋白法：

　　可检查受检者红细胞是否已被不完全抗体致敏。

　　间接抗球蛋白法：可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体。本法虽较灵敏，但也有一定限度，且操作复杂，不利于急诊检查和血库的大批量工作。

　　(3)聚凝胺法配血法：

　　可以检出IgM与IgG两种性质的抗体，能发现可引起溶血性输血反应的几乎所有规则与不规则抗体，故本法已逐渐推广使用。

　　配血原理

　　聚凝胶分子是带有高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷，可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝集，低离子强度溶液也能减低红细胞Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。

　　(4)凝胶配血法：

　　又称微管(板)凝胶抗球蛋白试验，此法在凝胶中进行，保持了传统抗球蛋白试验的准确性、同时具有简便、可靠的特点，全自动血型分析仪进行交叉配血，也是利用凝胶配血。其他可检出不完全抗体的方法有蛋白酶法、胶体介质法等。

　　4.质量控制

　　(1)血液标本：交叉配血的血液标本，受血者标本应为新鲜血，供血者标本应为血袋两端刚剪下小管中的血液。

　　(2)选用方法：用试管法做交叉配血。

　　(3)溶血现象：配血管出现溶血现象，为配血不合。

　　(五)AB0血型鉴定及交叉配血中常见错误

　　1.分型血清方面的原因

　　(1)自制分型血清抗体：效价太低、亲和力不强，造成定型不准确。

　　(2)患者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症：如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症等，可产生缗钱状假凝集。

　　(3)患者输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物：可引起红细胞聚集，易误认为凝集。

　　(4)血清中可能存在的不规则抗体：如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体，能凝集A1红细胞。有些癌症患者(如胃癌、胰腺癌等)血中含有大量可溶性A或B物质，这些物质可中和抗血清的抗体，从而抑制反应，造成假性不凝集。克服的办法是红细胞先洗涤后再试验。

　　(5)婴儿尚未产生自己的抗体或有从母亲获得的血型抗体：新生儿不宜用血清作反定型。

　　(6)老年人血型抗体水平下降：某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病，遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定型错误。

　　2.红细胞方面的原因

　　(1)用近期内输过血的患者血液做对照红细胞：此时，患者血液中红细胞为混合型细胞。

　　(2)患者红细胞被大量抗体包被：例如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞，或红细胞悬浮于高浓度蛋白的介质中，红细胞都会自发地发生凝集。

　　(3)红细胞膜有遗传性或获得性异常。

　　(4)抗原变异：A或B的弱抗原易判为不凝集(假阴性)，而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。有些细菌含有乙酰基酶，能使特异性A型物质末端的N-乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖，从而使A型获得类B抗原后易误定为AB型。由于患白血病或某些恶性肿瘤(如Hodgkin病)使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原也较青壮年为弱。

　　(5)血清中有高浓度血型物质：当用血清配制红细胞悬液时，血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。

　　(6)红细胞被细菌污染：细菌的酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露了人人都有的T抗原，被具有抗T活性的IgM凝集。

　　(7)嵌合体现象：混合细胞群见于异卵双生子。如：有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。

　　3.操作方面的原因：是最常见原因。

　　(1)操作器材：玻璃器皿不洁或使用了严重污染的血清、红细胞，可出现假阳性。试管污染洗涤剂会造成假阴性。

　　(2)红细胞与血清比例和离心：红细胞与血清比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。

　　(3)溶血现象：误认为溶血现象为阴性结果。

　　(4)试验温度：温度过高会造成假阴性。AB0血型系统的IgM抗体最适温度为4～22℃，如达37℃凝集力即下降。

　　(5)信息记录差错：标本、试剂、标签、加样弄错，或出现记录错误。大批标本检查时搞错标本号，张冠李戴最易造成错误。

　　(六)AB0血型系统主要临床意义

　　1.输血　是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血。

　　2.新生儿溶血病　母婴AB0血型不合引起的新生儿溶血病(常为第1胎溶血)，主要依靠血型血清学检查作出诊断。

　　3.器官移植 受者与供者必须AB0血型相符才能移植。

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